(北京)為了 建立單細(xì)胞克隆人胚胎干細(xì)胞系,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。研究者 采取分離自人囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)并傳代20代的細(xì)胞,用胰酶消化將細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液,將單個(gè)細(xì)胞接種至96孔板,生長(zhǎng)出的細(xì)胞集落用膠原酶消化傳代,采用細(xì)胞化學(xué)法和免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物;采用常規(guī)G帶法分析細(xì)胞染色體核型,將細(xì)胞接種至嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠后腿肌肉內(nèi),觀察細(xì)胞多向分化潛能。結(jié)果 接種的96個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)出2個(gè)細(xì)胞集落,擴(kuò)增建立了2個(gè)單細(xì)胞克隆人胚胎干細(xì)胞系,穩(wěn)定增殖了12個(gè)月,傳代48代。細(xì)胞呈集落狀生長(zhǎng),細(xì)胞核大、核仁明顯;具有穩(wěn)定的46XX核型;細(xì)胞的堿性磷酸酶、階段特異性胚胎抗原(SSEA)4、腫瘤識(shí)別抗原(TRA)1-60、TRA-1-81等特征性細(xì)胞表面標(biāo)志物呈陽(yáng)性;接種至嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠后腿肌肉內(nèi)的細(xì)胞,形成了包含神經(jīng)組織、軟骨組織、鱗狀上皮組織及柱狀上皮組織等來(lái)源于3個(gè)胚層組織細(xì)胞的畸胎瘤。可見 本研究成功建立了單細(xì)胞克隆人胚胎干細(xì)胞系,其生物學(xué)特性穩(wěn)定。 /**/