（長(zhǎng)沙）為了應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)含有大鼠胰腺十二指腸同源框-1(PDX-1)基因的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞。研究者利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)克隆大鼠PDX-1基因，酶切后插入經(jīng)相同酶切及磷酸化處理的含綠色熒光蛋白(GFP)的空白載體pEGFP-C2，構(gòu)成重組質(zhì)粒，再進(jìn)行HindⅢ、BglⅡ雙酶切篩選、鑒定并測(cè)序；陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染后，熒光顯微鏡下觀察熒光并計(jì)算轉(zhuǎn)染效率從而對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果限制性酶切分析證實(shí)重組后的載體成功載入PDX-1基因；克隆的目的片斷經(jīng)序列測(cè)定與Genebank公布的序列一致；轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化后重組載體在胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中有效表達(dá)。可見在國(guó)內(nèi)首次成功克隆了大鼠PDX-1基因，并構(gòu)建了含有PDX-1基因的真核表達(dá)載體；通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件提高了轉(zhuǎn)染效率， 為將表達(dá)PDX-1基因的胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 /**/