（上海）為了構(gòu)建乙型肝炎病毒(HBV)中國株及其拉米夫定耐藥相關(guān)變異株的重組桿狀病毒。研究者將1.2倍HBV基因組(血清adr型、基因C型)連接至桿狀病毒的轉(zhuǎn)移載體pFastBacI上，然后轉(zhuǎn)化入DH10Bac菌株中，在細(xì)菌內(nèi)的輔助質(zhì)粒輔助作用下與桿狀病毒基因組Bacmid發(fā)生位點特異性轉(zhuǎn)座，形成含有HBV基因組的重組Bacmid，轉(zhuǎn)染昆蟲sf9細(xì)胞后，包裝產(chǎn)生HBV重組桿狀病毒vAcHBVc。采用連續(xù)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)引入方法進行定點突變，構(gòu)建YVDD變異株質(zhì)粒，并按照上述方法構(gòu)建HBV YVDD變異株重組桿狀病毒vAcHBVYVDD，擴增并滴定。為便于觀察重組桿狀病毒的轉(zhuǎn)染和擴增效率及病毒滴度測定，同時構(gòu)建了含綠色熒光蛋白(GFP)的HBV重組桿狀病毒vAcGFPHBVc。結(jié)果 HBV野毒株和變異株重組桿狀病毒均構(gòu)建成功，通過免疫空斑及TCID50定量測定病毒滴度為106～108pfu/ml左右。可見應(yīng)用Bac to Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)可有效快速地構(gòu)建HBV C型重組桿狀病毒，以用于HBV體外復(fù)制系統(tǒng)的建立，為HBV野毒株及變異株生物學(xué)特性的研究及抗病毒藥物的篩選提供技術(shù)平臺。/**/