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聯(lián)合轉(zhuǎn)移人HT和DAF基因?qū)δM異種移植超急性排斥反應(yīng)的抑制 【?2008-04-08 發(fā)布?】 臨床報道
該項研究目的是探討聯(lián)合轉(zhuǎn)移人α1,2-巖藻糖苷轉(zhuǎn)移酶(HT)和衰變加速因子(DAF)基因?qū)δM異種移植超急性排斥反應(yīng)的抑制作用。方法采用通過顯微注射制備轉(zhuǎn)人HT及DAF基因的子代小鼠,以聚合酶鏈反應(yīng)和流式細(xì)胞儀篩選出人HT和(或)DAF基因整合與表達(dá)陽性的子代轉(zhuǎn)基因小鼠。以同時表達(dá)人HT和DAF基因的小鼠為實驗組,單一表達(dá)人HT或DAF基因的小鼠為HT對照組和DAF對照組,取其心臟,采用改良的Langendorff心臟灌注裝置灌注心臟,先以KH液逆向灌注,30min后再以含15%(體積分?jǐn)?shù))人AB血清的Krebs―Henseleit液(KH液)灌注。記錄不同灌注時間的心率、左心室收縮壓及左心室舒張末壓,計算左心室獲得壓,以心率與左心室獲得壓的乘積作為心臟左心室收縮功能的指標(biāo),免疫組化法觀察灌注后的心臟血管內(nèi)皮細(xì)胞和組織中IgM與C3c的沉積情況。結(jié)果KH液灌注過程中,各組間心臟做功能力的差異無統(tǒng)計學(xué)意義;KH液中加入人血清后,HT對照組和DAF對照組的心臟做功能力明顯下降,在灌注60min時心臟做功分別為最大值的27%和23%,平均做功時間分別為118min和89min,普通小鼠心臟在灌注后50min時停止搏動,而實驗組的心臟做功能力下降緩慢,至60min時心臟做功維持在最大值的67%以上,平均做功時間為225min,其心臟做功能力與搏動時間高于HT對照組和DAF對照組(P〈0.05)。免疫組化染色顯示,實驗組小鼠心臟血管內(nèi)皮細(xì)胞與組織中未見IgM和C3c沉積,HT對照組可見C3c少量沉積,DAF對照組可見IgM沉積和C3c少量沉積,普通小鼠心臟可見IgM和C3c沉積。由此得出結(jié)論小鼠聯(lián)合轉(zhuǎn)移人HT和DAF基因后,其心臟在人血清灌注下的免疫損傷明顯減輕,這可能對抵御異種移植超急性排斥反應(yīng)有一定幫助。/**/
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