（南京）為了克隆人促凋亡基因(second mitochondria-derived activator of caspases，Smac)，研究Smac基因轉(zhuǎn)染對(duì)Burkitt's淋巴瘤Raji細(xì)胞的促凋亡作用，研究者從人胚腎293細(xì)胞中擴(kuò)增人Smac基因全長(zhǎng)的cDNA，構(gòu)建含Smac基因全長(zhǎng)cDNA的真核表達(dá)載體pcDNA3.1/Smac，并轉(zhuǎn)染人Burkitt's淋巴瘤Raji細(xì)胞；用Western blot測(cè)定外源基因的表達(dá)；Hoechest 33 258和碘化丙錠雙熒光染色；結(jié)合激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡百分率；比色法測(cè)定caspase-3酶活性。結(jié)果成功克隆人Smac基因全長(zhǎng)cDNA，并構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1/Smac；轉(zhuǎn)染人Smac基因全長(zhǎng)cDNA的真核表達(dá)載體24 h，可顯著誘導(dǎo)Burkitt's淋巴瘤Raji細(xì)胞的凋亡，凋亡百分率達(dá)(43.7±2.5)%；轉(zhuǎn)染人Smac基因全長(zhǎng)cDNA的真核表達(dá)載體24 h，可顯著誘導(dǎo)Raji細(xì)胞中caspase-3酶活性上調(diào)，吸光度為0.936±0.041，與正常對(duì)照組(0.138±0.026)及空載體轉(zhuǎn)染對(duì)照組(0.136±0.036)相比，P <0.05。可見轉(zhuǎn)染并表達(dá)外源性Smac基因，可顯著誘導(dǎo)人Burkitt's淋巴瘤Raji細(xì)胞凋亡。其機(jī)制可能與caspase-3酶活性上調(diào)有關(guān)。 /**/