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人尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在腎小管上皮細(xì)胞的定位表達(dá)研究

【?2006-01-20 發(fā)布?】 臨床報(bào)道  

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    (北京)為了明確人尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(hUAT)在人腎小管上皮細(xì)胞(HKC)內(nèi)的定位表達(dá)情況。研究者利用DNA重組技術(shù)構(gòu)建hUAT。綠色熒光蛋白的融合基因分別導(dǎo)入人HKC及非洲爪蟾卵細(xì)胞。構(gòu)建hUAT的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)融合表達(dá)載體并制備抗hUAT的多克隆抗體。利用免疫熒光、Western印跡及激光共聚焦顯微鏡等技術(shù)觀察hUAT在人HKC的定位表達(dá)。結(jié)果成功制備了兔抗hUAT-GST多克隆抗體。利用該抗體及構(gòu)建的pEGFP-hUAT熒光表達(dá)載體進(jìn)行Western印跡和免疫熒光檢測(cè),結(jié)果表明hUAT是一種膜蛋白,并且表達(dá)于人HKC胞膜上,Northern blot結(jié)果也表明人HKC在高尿酸環(huán)境中的hUAT表達(dá)水平明顯上調(diào)。可見hUAT并非典型的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可能是以二聚體的形式才能夠表達(dá)在細(xì)胞膜上,它在細(xì)胞內(nèi)的定位表達(dá)可能需要特殊的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。 
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