（杭州）為了構(gòu)建人原發(fā)性肝癌組織cDNA文庫，篩查與原發(fā)性肝癌發(fā)生特異相關(guān)的基因，為探討原發(fā)性肝癌的發(fā)病機制及基因治療奠定基礎(chǔ)。研究者提取人原發(fā)性肝癌組織總RNA并純化其mRNA,逆轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA，長距離聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)合成雙鏈cDNA；PCR產(chǎn)物經(jīng)蛋白酶K水解并純化后，進行SfiⅠ酶酶切；將酶切產(chǎn)物進行分級分離，回收0.4kb以上的組分，并與λTriplEx2載體連接,將連接產(chǎn)物經(jīng)體外蛋白包裝，產(chǎn)生未擴增文庫；檢測未擴增文庫的滴度和重組效率后，進行文庫擴增；檢測擴增后文庫的滴度和重組效率，隨機挑取14個噬菌斑，用載體克隆位點兩端的通用引物進行PCR擴增，以檢測所構(gòu)建的cDNA文庫的質(zhì)量。結(jié)果未擴增文庫的滴度為1.37×106pfu/ml，重組效率為97.46%；擴增后文庫滴度為1.28×109pfu/ml，重組效率為99.06%；插入片段平均長度為0.95kb，長度在1.0～2.0kb的4個，0.75～1.0kb的4個，0.5～0.75kb的6個。可見已成功構(gòu)建一個乙型肝炎肝硬化基礎(chǔ)上發(fā)生的人原發(fā)性肝癌組織cDNA文庫。 /**/