（北京）為了構(gòu)建并篩選出最有效的HPV16 E6基因特異的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)表達(dá)載體，觀察其對宮頸癌細(xì)胞中HPV16 E6基因表達(dá)的長期影響，探討E6基因在宮頸癌發(fā)生過程中的分子作用機(jī)制，為臨床HPV感染及宮頸癌治療探索新方法。研究者構(gòu)建Hairpin siRNA質(zhì)粒，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細(xì)胞，鑒定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的質(zhì)粒DNA，通過Real-Time RT-PCR檢測細(xì)胞中HPV16 E6mRNA表達(dá)，采用Western-blot檢測p53、p21等蛋白的變化。MTT法(四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法)檢測SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA后細(xì)胞增殖曲線。結(jié)果HPV16 E6A hairpin siRNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人宮頸癌SiHa細(xì)胞，可以在細(xì)胞內(nèi)長期表達(dá)siRNA，有效抑制細(xì)胞內(nèi)HPV16 E6基因的表達(dá)。E6A siRNA能抑制細(xì)胞生長，作用持續(xù)達(dá)4個月以上。可見利用siRNA表達(dá)載體抑制整合在細(xì)胞中的外源HPV E6病毒癌基因可能是治療HPV感染和宮頸癌的一種新的理想方法。 /**/