該項(xiàng)研究的目的是建立國(guó)人前列腺癌噬菌體Fab抗體片段庫(kù)，篩選、鑒定抗前列腺特異性膜抗原（PSMA）的人源Fab抗體可變區(qū)的編碼基因，為前列腺癌的診斷與基因治療研究開辟新途徑。方法采用20例前列腺癌患者外周血分離淋巴細(xì)胞，提取其總RNA，經(jīng)RTPCR及半套式擴(kuò)增得到免疫球蛋白全部輕鏈和重鏈Fd段基因，克隆進(jìn)載體pComb3，并電轉(zhuǎn)化大腸桿菌XLl-Blue，構(gòu)建前列腺癌噬菌體Fab抗體片段庫(kù)。采用噬菌體表面展示技術(shù)，以PSMA原核表達(dá)重組子pET30a（＋）-PSMA誘導(dǎo)表達(dá)并純化后的PSMA為固相抗原，從噬菌體Fab抗體庫(kù)中經(jīng)過(guò)“吸附洗脫擴(kuò)增”篩選過(guò)程，獲得抗原結(jié)合活性和特異性較強(qiáng)的PSMA人源Fab可變區(qū)抗體基因片段的陽(yáng)性克隆，并進(jìn)行免疫檢測(cè)及序列測(cè)定。結(jié)果成功構(gòu)建前列腺癌噬菌體抗體Fab片段庫(kù)，其輕鏈及重鏈Fd段與載體DNA的重組率分別為87％、79％，庫(kù)容為2．32×10^7，滴度為8．7×10^13pfu／ml。篩選得到Fab抗體克隆的Fd段基因核苷酸序列為696bp，編碼由232個(gè)氨基酸殘基組成的多肽，與人免疫球蛋白γ鏈恒定區(qū)的同源性為98％；輕鏈κ基因核苷酸序列為630bp，編碼由210個(gè)氨基酸殘基組成的多肽，與κ鏈恒定區(qū)同源性為93％。由此得出結(jié)論成功構(gòu)建了前列腺癌噬菌體抗體庫(kù)，并獲得了PSMA人Fab抗體可變區(qū)編碼基因克隆，該克隆抗體基因具有典型的免疫球蛋白輕鏈和重鏈可變區(qū)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，基因編碼產(chǎn)物具有與PSMA反應(yīng)的免疫學(xué)活性和特異性。/**/